La Facility di microscopia ottica avanzata (AICF) offre accesso a una vasta collezione di microscopi ottici all'avanguardia, permettendo agli utenti di spaziare dalle osservazioni di base con luce trasmessa alle tecniche avanzate di imaging in fluorescenza in vivo. Il personale della Facility fornisce supporto tecnico e scientifico specializzato in ogni fase degli esperimenti di imaging, dalla progettazione sperimentale all'acquisizione delle immagini, fino all'elaborazione e all'analisi dei dati.
Applicazioni e servizi
Le applicazioni e i servizi offerti dalla Struttura includono:
- Microscopia a super-risoluzione: PALM, dSTORM, SIM e TIRF-SIM
- Microscopia confocale: sistemi a scansione laser confocale e spinning disc
- Microscopia wide-field a fluorescenza: microscopi dritti e rovesciati
- Sezionamento ottico wide-field con illuminazione strutturata (modulo Zeiss Apotome 2)
- Imaging in fluorescenza time-lapse e in vivo (a campo largo e confocale) con sistemi di incubazione che consentono il controllo delle condizioni ambientali per lunghi periodi
- Imaging su grandi aree (mosaici) su campioni di grandi dimensioni (come sezioni di cervello di topo o preparazioni istologiche)
- Altre tecniche di microscopia a fluorescenza disponibili: FRAP, FRET, smFRET, Single-Particle Tracking, HILO e TIRF
- Metodi di contrasto in luce trasmessa: campo chiaro, campo scuro, contrasto di fase e contrasto interferenziale differenziale (DIC)
- Microdissezione laser di tessuti a livello di singola cellula (su campioni fissati e cellule vive in coltura)
- Preparazioni di campioni istologici (processore automatico di tessuti, centralina di inclusione in paraffina, strumenti di taglio per sezioni di tessuto e stereo-microscopi a fluorescenza dedicati)
- Elaborazione delle immagini, scrittura di pipeline di analisi automatizzate e servizio di analisi dei dati usando software come ImageJ/Fiji, SVI Huygens Core e Essential (per deconvoluzione), Leica LasAF/LasX, Zeiss ZEN e Nikon NIS Elements
Il personale della Facilty può offrire:
- Supporto tecnico nella progettazione sperimentale, nell'acquisto e nella configurazione dei microscopi
- Corsi di formazione per l'uso autonomo dei microscopi
- Affiancamento per utenti non autonomi
- Servizi di acquisizione immagini
- Servizi di elaborazione immagini, macro-scripting e analisi dei dati
Dotazione della Facility: Strumenti e Software per l’analisi dei dati
Sistemi wide-field
- Microscopio rovesciato Leica DMi8 completamente motorizzato, equipaggiato con LED bianco Lumencor Sola e camera monocromatica sCMOS Andor Zyla 4.
- Microscopio dritto Zeiss Axio Imager M2 completamente motorizzato, dotato di lampada a fluorescenza metal halide X-CITE 120 e di una camera monocromatica e una colorata (Zeiss Axiocam 305 mono e Zeiss Axiocam 705 color).
- Microscopio rovesciati Zeiss Axio Observer Z1 completamente motorizzato, equipaggiato con due sorgenti luminose (LED multicolore Colibri 2 e lampada a fluorescenza metal halide HXP 120), modulo ApoTome 2 per illuminazione strutturata e incubatore Pecon con moduli di controllo per osservazioni su cellule vive.
Sistemi confocali
- Microscopio confocale a scansione laser Leica TCS SP8 basato su un microscopio rovesciato Leica DMi8 completamente motorizzato, dotato di: LED bianco Lumencor Sola, laser a linee multiple, un detector PMT HyD e tre detector PMT convenzionali, oltre a un detector per la luce trasmessa. La separazione dei canali è realizzata tramite un detector spettrale a prisma. Il software Leica LAS X include moduli per FRET, FRAP e il pacchetto di deconvoluzione proprietario (Lightning).
- Sistema CREST V3 X-light Spinning Disc basato su un microscopio rovesciato Nikon Eclipse Ti2 completamente motorizzato, equipaggiato con: banco laser a linee multiple CELESTA, due camere digitali (una monocromatica sCMOS Andor Zyla 4.2 e una monocromatica EMCCD Andor iXon 888) e un sistema di incubazione Okolab per osservazioni su cellule vive. Il software Nikon AR include il modulo di deconvoluzione proprietario di Nikon (NIS.ai).
- Sistema confocale a scansione laser Nikon AX basato su un microscopio rovesciato Nikon Eclipse Ti2 completamente motorizzato, equipaggiato con: banco laser a linee multiple, LED multi-linea Nikon D-LEDI e camera digitale monocromatica sCMOS Hamamatsu ORCA Flash 4.0, con due detector GaAsP ultra-sensibili e due detector PMT convenzionali, oltre a un detector per la luce trasmessa. Questo sistema consente anche acquisizioni SIM (Microscopia a Illuminazione Strutturata) 2D e 3D e TIRF (Fluorescenza a Riflessione Interna Totale) grazie al modulo Nikon N-SIM S. Il software Nikon AR include il modulo di deconvoluzione proprietario di Nikon (NIS.ai).
Sistemi a super-risoluzione
- Sistema a super-risoluzione Nikon N-SIM S basato su un microscopio rovesciato Nikon Eclipse Ti2 completamente motorizzato, dotato di: banco laser a linee multiple, LED multi-linea Nikon D-LEDI e camera digitale monocromatica sCMOS Hamamatsu ORCA Flash 4.0. Oltre alle acquisizioni wide-field e SIM (SIM 2D, 3D e TIRF 2D), questo sistema consente anche acquisizioni confocali grazie al modulo Nikon AX. Il software Nikon AR include il modulo di deconvoluzione proprietario di Nikon (NIS.ai).
- Sistema rovesciato ONI Nanoimager completamente motorizzato, equipaggiato con laser a linee multiple e LED come sorgenti luminose, e camera digitale monocromatica sCMOS Hamamatsu ORCA Flash 4.0. Tecniche disponibili: wide-field, TIRF, HILO (Highly Inclined and Laminated Optical sheet), dSTORM (Stochastic Optical Reconstruction Microscopy), PALM (Photoactivated Localization Microscopy), Single-particle tracking (SPT), Single-molecule FRET (smFRET), SIM basata su DMD e microscopia confocale.
Sistema di microdissezione laser
- Sistema di microdissezione laser Leica LMD6500 basato su un microscopio rovesciato Leica DM6000 B.
Stereomicroscopi
- Stereomicroscopi a fluorescenza manuali Leica MZ 10F, 16F e Leica S9i.
Strumenti istologici
- Criostato Leica CM 1850 UV.
- Criostato Thermo Scientific HM525 NX.
- Microtomo Leica HistoCore Biocut.
- Vibratomo Leica VT 1200.
- Processore di tessuti Histo-Line HistoPro200.
- Centralina di inclusione in paraffina Histo-Line TEC 2900.